บริการวิเคราะห์การซึมผ่านของลำไส้ด้วย Franz Cell โดยใช้ลำไส้เล็กของสุกรพร้อมบัฟเฟอร์ Krebs-Ringer HEPES

การทดสอบดูดซึมของลำไส้ Intestine Absorption (Franz Cell, Porcine Intestine, Krebs-Ringer, 1 Time Point)

วัสดุที่ต้องการ:

• เซลล์การแพร่กระจายของฟรานซ์
• ลำไส้หมู (สดหรือเก็บไว้อย่างเหมาะสม)
• บัฟเฟอร์ Krebs-Ringer (บัฟเฟอร์ HEPES หรือโซเดียมไบคาร์บอเนต ขึ้นอยู่กับการตั้งค่า)
• ช่องผู้บริจาคและตัวรับสำหรับเซลล์ฟรานซ์
• เครื่องกวนแม่เหล็ก
• เข็มฉีดยาและเข็ม
• เครื่องวัดพีเอช
• ตู้ฟักหรืออ่างน้ำ (หากจำเป็นเพื่อรักษาอุณหภูมิ)
• เครื่องมือวิเคราะห์ (เช่น HPLC, สเปกโตรโฟโตมิเตอร์) สำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่าง
• สารประกอบการดูดซึม (สารทดสอบ)

การตระเตรียม:

1. เตรียมบัฟเฟอร์ Krebs-Ringer :

   • สำหรับบัฟเฟอร์ HEPES: ละลาย NaCl, KCl, CaCl₂, MgSO₄, NaH₂PO₄, กลูโคส และ HEPES ในปริมาณที่เหมาะสมในน้ำกลั่น ปรับ pH เป็น 7.4
   • สำหรับบัฟเฟอร์โซเดียมไบคาร์บอเนต: เตรียมในลักษณะเดียวกันแต่ใช้ NaHCO₃ แทน HEPES และปรับ pH ด้วยสภาพแวดล้อม CO₂ หากจำเป็น

2. เตรียมลำไส้หมู :

   • รับลำไส้หมูสดจากแหล่งที่เหมาะสม
   • ทำความสะอาดลำไส้เพื่อขจัดเนื้อหาและเศษเยื่อเมือก
   • ตัดลำไส้ออกเป็นส่วนที่เหมาะสมสำหรับติดบนเซลล์ฟรานซ์

3. ติดเนื้อเยื่อลำไส้ :

   • ติดตั้งส่วนของลำไส้อย่างระมัดระวังระหว่างช่องผู้บริจาคและตัวรับของเซลล์ฟรานซ์ ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีการรั่วไหลและเนื้อเยื่ออยู่ในตำแหน่งที่ปลอดภัย

การตั้งค่าการทดสอบ:

4. เติมช่องรับน้ำ :

   • เติมบัฟเฟอร์ Krebs-Ringer ในช่องตัวรับ เพื่อให้แน่ใจว่าส่วนผสมเข้ากันดีและมีอากาศถ่ายเท ช่องนี้จะเลียนแบบฝั่งเลือดของลำไส้
   • วางแท่งแม่เหล็กในช่องตัวรับเพื่อการผสมอย่างต่อเนื่อง

5. เพิ่มสารประกอบทดสอบลงในช่องผู้บริจาค :

   • ใส่สารประกอบทดสอบ (สารที่คุณต้องการศึกษาเพื่อการดูดซึม) ไปที่ช่องผู้บริจาค ช่องนี้แสดงถึงด้านลูเมนของลำไส้
   • สารประกอบควรอยู่ในตัวทำละลายหรือพาหะที่เหมาะสมซึ่งไม่ทำลายเนื้อเยื่อ

6. รักษาเงื่อนไขการทดลอง :

   • วางเซลล์ฟรานซ์ไว้ในตู้ฟักหรืออ่างน้ำเพื่อรักษาอุณหภูมิทางสรีรวิทยา (ปกติจะอยู่ที่ประมาณ 37°C)
   • ตรวจสอบให้แน่ใจว่ามีการคนอย่างต่อเนื่องในช่องตัวรับเพื่อจำลองการไหลเวียนของเลือดและเพื่อป้องกันการก่อตัวของชั้นขอบเขต

การสุ่มตัวอย่าง:

7. การเก็บตัวอย่าง :

   • ตามช่วงเวลาที่กำหนดไว้ล่วงหน้า (เช่น ทุกๆ 30 นาทีหรือทุกชั่วโมง) ให้ถอนของเหลวจำนวนเล็กน้อยออกจากช่องรับยาโดยใช้หลอดฉีดยา
   • เปลี่ยนปริมาตรที่ถอนออกด้วยบัฟเฟอร์ Krebs-Ringer ใหม่เพื่อรักษาปริมาตรให้คงที่

8. วิเคราะห์ตัวอย่าง :

   • วิเคราะห์ตัวอย่างที่เก็บมาโดยใช้เทคนิคการวิเคราะห์ที่เหมาะสม (เช่น HPLC, UV-spectrophotometry) เพื่อกำหนดความเข้มข้นของสารประกอบทดสอบ
   • พล็อตความเข้มข้นของสารประกอบทดสอบในช่องของตัวรับเมื่อเวลาผ่านไปเพื่อประเมินอัตราการดูดซึม